磷酸三邻甲苯酯诱导鸡迟发神经毒性模型和苯甲基磺酰氟的预处理

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2014.49.003

中国组织工程研究 ›› 2014, Vol. 18 ›› Issue (49): 7884-7890.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2014.49.003

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磷酸三邻甲苯酯诱导鸡迟发神经毒性模型和苯甲基磺酰氟的预处理

左恩俊¹，朴丰源²，姜莹³

¹大连医科大学口腔医学院，辽宁省大连市 116044；²大连医科大学劳动卫生与环境卫生学教研室，辽宁省大连市 116044；³大连医科大学杂志社，辽宁省大连市 116044

修回日期:2014-09-09 出版日期:2014-11-30 发布日期:2014-11-30
通讯作者: 姜莹，博士，讲师，大连医科大学杂志社，辽宁省大连市 116044
作者简介:左恩俊，男，1981年生，黑龙江省鹤岗市人，汉族，2007年佳木斯大学毕业，硕士，主要从事基础医学方面的研究。
基金资助:
国家自然科学基金(81102160，30771819)

Organophosphorus poisoning-induced delayed neuropathy hen model induced by triorthocresyl phosphate and phenylmethylsulfonyl fluoride intervention

Zuo En-jun¹, Piao Feng-yuan², Jiang Ying³

¹College of Stomatology, Dalian Medical University, Dalian 116044, Liaoning Province, China;²Department of Occupational and Environmental Health, Dalian Medical University, Dalian 116044, Liaoning Province, China;³Press of Journal, Dalian Medical University, Dalian 116044, Liaoning Province, China

Revised:2014-09-09 Online:2014-11-30 Published:2014-11-30
Contact: Jiang Ying, M.D., Lecturer, Press of Journal, Dalian Medical University, Dalian Medical University, Dalian 116044, Liaoning Province, China
About author:Zuo En-jun, Master, College of Stomatology, Dalian Medical University, Dalian 116044, Liaoning Province, China
Supported by:
the National Natural Science Foundation of China, No. 81102160, 30771819

摘要/Abstract

摘要：

背景：接触有机磷化合物可导致迟发神经病的发生，然而因为迟发性神经病发生的确切机制不清楚而尚无有效的治疗方法。

目的：构建磷酸三邻甲苯酯诱导鸡迟发性神经毒性模型并观察苯甲基磺酰氟预处理的影响。

方法：将成年罗曼母鸡随机分为2个磷酸三邻甲苯酯染毒组，苯甲基磺酰氟预处理组和对照组。其中磷酸三邻甲苯酯染毒组浓度分别为1 000 mg/kg和750 mg/kg，均一次性灌胃；苯甲基磺酰氟预处理组先将苯甲基磺酰氟按40 mg/kg剂量给鸡皮下注射，24 h后，再经灌胃一次性给鸡1 000 mg/kg的磷酸三邻甲苯酯；而对照组则给予等量生理盐水。使用6分制来评价迟发性神经病临床症状并记录鸡的体质量变化。在染毒第5，21天分别断头处死鸡，制备电镜切片并于电镜下观察。

结果与结论：磷酸三邻甲苯酯染毒后鸡临床症状随着时间的延长而渐进性加重(P < 0.05)，体质量显著降低(P < 0.05)，但苯甲基磺酰氟预处理组鸡与对照组鸡实验期间则无任何迟发性神经病异常表现和体质量变化。磷酸三邻甲苯酯组染毒5 d后，发现一些线粒体有轻微肿胀，轴突内微丝微管排列发生可疑改变，但是其他细胞器没有明显异常改变。磷酸三邻甲苯酯组染毒21 d后，脑神经元退行性改变明显，内质网肿胀，线粒体异常改变，细胞骨架排列紊乱。1 000 mg/kg的磷酸三邻甲苯酯为最佳染毒剂量。结果显示，实验成功建立了磷酸三邻甲苯酯诱导鸡迟发性神经毒性模型和苯甲基磺酰氟预处理模型，苯甲基磺酰氟预处理能明显改善磷酸三邻甲苯酯染毒后鸡迟发性神经病的临床症状和病理改变。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程

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关键词: 实验动物, 组织工程, 有机磷化合物, 迟发性神经病, 磷酸三邻甲苯酯, 苯甲基磺酰氟, 超微结构, 剂量, 体质量, 线粒体, 内质网, 国家自然科学基金

Abstract:

BACKGROUND: Although incidents of organophosphorus poisoning-induced delayed neuropathy (OPIDN) have been documented for over a century, the molecular mechanisms underlying the axonopathy remain poorly understood. Therefore, OPIDN treatment has been increasingly concerned.

OBJECTIVE: To construct the OPIDN hen model induced by triorthocresyl phosphate (TOCP) and to explore the effect of phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF) intervention.

METHODS: Adult hens were randomly divided into four groups: two TOCP groups, a PMSF group and a control group. TOCP groups were treated with TOCP by gavage at a single dosage of 1 000 mg/kg and 750 mg/kg respectively; control group was given an equivalent volume of saline by gavage while hens in the PMSF group were subcutaneously injected with 40 mg/kg PMSF 24 hours after 1 000 mg/kg TOCP injection. OPIDN neurological signs were assessed by a six-point graded scale. The changes of the hen weight were recorded. The hens were killed on day 5 and 21 post-dosing. The samples were cut into 50 nm thick sections and examined by transmission electron microscopy.

RESULTS AND CONCLUSION: OPIDN neurological signs such as abnormal gaits progressed in severity with time (P < 0.05), and the hen weight was significantly decreased in TOCP groups (P < 0.05). However, no clinical signs of delayed neurotoxicity were observed in hens of the PMSF group and the control group during the experiment period. The mild mitochondrial swelling and the fragmentation of microfilament and microtubule arrangement in axons were observed on day 5 post-dosing, leaving the other organelles remained unchanged. On day 21, neuronal degeneration was apparent, including swelling of endoplasmic reticulum, abnormal change of mitochondria, and disordered arrangement of cytoskeleton. The optimal dose of TOCP was 1 000 mg/kg. Experimental findings indicate that, OPIDN hen model induced by TOCP and PMSF intervention hen model were successfully constructed. PMSF intervention significantly improved the pathologic changes and clinical symptoms of OPIDN induced by TOCP in hens.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程

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Key words: tissue engineering, organophosphorus compound, cytoskeleton, mitochondrion, endoplasmic reticulum

中图分类号:

R318

左恩俊，朴丰源，姜莹. 磷酸三邻甲苯酯诱导鸡迟发神经毒性模型和苯甲基磺酰氟的预处理[J]. 中国组织工程研究, 2014, 18(49): 7884-7890.

Zuo En-jun, Piao Feng-yuan, Jiang Ying. Organophosphorus poisoning-induced delayed neuropathy hen model induced by triorthocresyl phosphate and phenylmethylsulfonyl fluoride intervention [J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2014, 18(49): 7884-7890.

图/表（结果） 3

2.1 实验动物数量分析 实验选用成年罗曼母鸡48只，均进入结果分析，无脱失值。

2.2 TOCP染毒鸡的OPIDN症状 适应性喂养期间，全体母鸡眼睛明亮；羽毛光洁；进食快速、有力；肛周清洁，同时脚趾曲伸灵活，步态稳健，活动自如(图1A)。轻微的步态改变发生在TOCP染毒后第7天的TOCP染毒组，临床症状随着时间的延长而渐进性加重，主要表现为：第7天起1 000 mg/kg TOCP染毒组母鸡最先出现轻微步履蹒跚，随后发现染毒组母鸡出现精神萎靡，下肢无力，行动迟缓、笨拙的现象。步态失调逐渐加重，表现为走路摇摆，站立不稳，并进一步加重为下肢震颤，活动时肢体关节经常突然打弯和臀部着地(图1B)。至21 d实验结束时，症状严重的母鸡以臀部及尾部贴近地面站立(图1C)，甚至出现不能保持一定姿势，始终处于横卧状态或根本不能移动身体的重度瘫痪症状(图1D)，但是各组染毒母鸡均没有死亡发生，各组具体OPIDN症状评分见图2。1 000 mg/kg TOCP染毒组母鸡全部出现OPIDN症状，而750 mg/kg TOCP染毒组母鸡有2只至21 d观察结束时仍没有诱发出OPIDN症状(表1)，因此，在随后的实验中，制备OPIDN模型的染毒剂量定为1 000 mg/kg。

迟发神经毒性致母鸡步态失调的同时伴有其他的异常表现，如OPIDN期间母鸡羽毛短缺、零乱、无光泽，有的母鸡有缩颈闭眼，反应迟钝现象，同时一些病情较重的母鸡因为行动受限而导致进食、饮水减少。PMSF预处理组母鸡在TOCP注射之后仅出现轻度有机磷急性中毒症状，并在染毒后第一两天完全恢复，之后到实验结束均没有发现任何异常的表现，而对照组母鸡实验期间则无任何异常表现。

2.3 TOCP染毒对母鸡体质量的影响 分别在TOCP染毒的第1，6，11，16，21天对各实验组母鸡的体质量进行测量，结果见表2。

各组母鸡体质量在前3个时间段变化没有显著区别，在第16，21天时，两个TOCP染毒组母鸡体质量显著低于正常对照组和PMSF预处理组(P < 0.05)，并表现出体质量随时间增加而减轻的趋势，而没有发现对照组与PMSF预处理组母鸡体质量随时间变化而改变的趋势。

2.4 OPIDN期间脑组织超微结构的改变 电镜切片取材来自于脑干。OPIDN期间神经组织超微结构如图3所示，对照组中脑神经元形态正常，细胞核完整且界限明显(图3A)，线粒体呈卵圆形或圆形小体，外被双层界膜，其中内界膜向内折成平行排列的嵴，内质网呈片层隙状或小管状正常结构(图3B)。

PMSF预处理组脑神经元超微结构与对照组相似，5，21 d两个时间段均没有发现有异常改变(图3C)。TOCP组染毒5 d后，发现个别线粒体有轻微肿胀，轴突内微丝微管排列发生可疑改变，但是其他细胞器没有明显异常改变(图3D)。

TOCP组染毒21 d后，脑神经元退行性改变明显，核膜模糊不完整，核周出现不规则空泡，内质网肿胀(图3F)，线粒体肿胀，空泡样改变，线粒体嵴变短变少、模糊，破碎(图3E)。

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引言

有机磷化合物(OP)是一类广泛应用于工业、农业、医药业、甚至军事领域的化合物，该类化合物主要引起3种神经毒性作用，分别是急性胆碱酯能毒作用、中间型综合征和迟发神经毒作用^[1]。有机磷化合物致迟发性神经病(organophosphorus poisoning-induced delayed neuropathy，OPIDN)是指某些有机磷化合物经一次性大剂量接触或者反复多次接触，在急性中毒和中间型综合征之后，经过7-14 d(或更长)的潜伏期出现的，以肢体感觉异常、运动障碍、共济失调、麻痹甚至瘫痪为主要临床特征的一类后果严重的神经退行性疾病^[2]。OPIDN所导致神经组织的病理变化以Wallerian样变性为主要特征，病变处髓鞘变性，轴索肿胀，细胞骨架聚集，同时还可以观察到滑面内质网增生，线粒体肿胀变性，线粒体嵴消失等改变^[3]。磷酸三邻甲苯酯(triorthocresyl phosphate，TOCP)是一种有机磷化合物，能诱导OPIDN。它被广泛用作增塑剂、软化剂、阻燃剂及机油添加剂，因为其烷基位于苯环的邻位上，是磷酸三甲苯酯3个异构体中惟一可以诱发OPIDN的化合物^[4]。20世纪30年代，在美国估计20 000多人因为饮用被TOCP污染的姜汁提取物而出现迟发神经症状，这是目前为止最严重的OPIDN流行事件，至此之后，世界范围内数万人因为OPIDN导致共济失调或是瘫痪^[5]。由于有机磷化合物的广泛应用，使得OPIDN在职业暴露人群中及普通人群中时有发生。然而，因为OPIDN发生机制并不十分清楚，目前尚无有效治疗方法。

苯甲基磺酰氟(phenylmethylsulfonyl fluoride，PMSF)是一种丝氨酸蛋白酶抑制剂，广泛用于OPIDN机制研究的实验中。谢克勤等^[6]报道，经灌胃一次性给予实验母鸡 750 mg/kg TOCP之前皮下注射60 mg/kg的PMSF，能有效抑制TOCP诱导的OPIDN发生。同时本课题组也通过一系列的实验证明，有机磷染毒之前24 h注射PMSF仅能诱导出有机磷急性毒性，但有效阻止了OPIDN症状和体征出现^[7-8]。PMSF的预处理甚至有效地保留了运动神经末梢功能，避免有机磷化合物诱发的神经电生理学及超微结构的异常改变等^[9-10]。在对有机磷化合物迟发神经毒性的机制研究之前，OPIDN模型的建立被认为非常重要，它是之后研究工作顺利开展，实验数据可靠的前提条件^[11]。

虽然TOCP染毒制备OPIDN模型已经被广泛应用，但是因为使用的实验动物母鸡来自普通的饲养场，可因为饲养场的条件不同，品系及遗传背景的不同对TOCP的敏感性也各不相同。因此，实验采用不同剂量的TOCP诱发母鸡OPIDN，采用PMSF作为OPIDN发生的保护剂，观察母鸡的行为学变化和OPIDN的发生情况，为之后的OPIDN机制研究选择最佳的染毒剂量；同时，选取5，21 d共2个时间点，电镜下观察TOCP染毒后脑超微结构的改变，以期了解TOCP诱发OPIDN所致的组织病理学损伤。

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材料方法

设计：随机对照动物实验。

时间及地点：于2013年4至10月在大连医科大学劳动卫生与环境卫生教研室实验室完成。

材料：

实验动物：健康10月龄罗曼母鸡48只，体质量1.5- 2.0 kg，购自大连韩伟养鸡场。

实验方法：

分组及TOCP染毒建模：成年罗曼母鸡48只，经适应性喂养1周，随机分为4组，分别是两个剂量的TOCP染毒组(750 mg/kg TOCP染毒组和1 000 mg/kg TOCP染毒组)，PMSF预处理组(PMSF+TOCP组)和对照组，每组12只。其中TOCP染毒组将TOCP溶于DMSO中，分别按浓度750，1 000 mg/kg经一次性灌胃；PMSF预处理组先将PMSF溶于DMSO中，后按40 mg/kg剂量给鸡皮下注射，24 h后，再经灌胃一次性给鸡1 000 mg/kg的TOCP。实验以此构建磷酸三邻甲苯酯诱导鸡迟发性神经毒性模型和苯甲基磺酰氟预处理模型。对照组则给予等量的生理盐水。各组动物饲以普通鸡饲料，饮用自来水，自由活动，饲养室每天照明12 h，温度20 ℃。其中每组6只鸡用于染毒后运动状况和OPIDN症状的观察，并定期测量鸡体质量直至21 d实验期满，剩余6只鸡用于微观形态结构观察。

OPIDN症状观察及评分：使用6分制来评价OPIDN临床症状^[12]。①正常(0分)，姿势体态无异常。②怀疑出现共济失调(1分)，母鸡腿部肌肉怀疑出现无力，并伴轻微蹒跚。③轻度共济失调(2分)，母鸡步履缓慢、笨拙，出现不协调步态。④重度共济失调(3分)，母鸡步态一直摇摆不停，并且肢体关节经常突然打弯和臀部着地。⑤轻度瘫痪(4分)，母鸡肢体无力、垂爪、靠臀部支撑保持坐势。⑥重度瘫痪(5分)，不能保持一定的姿势，始终处于横卧状态或根本不能移动身体。⑦迟发神经毒性导致死亡(6分)。

OPIDN期间神经组织超微结构的观察：在染毒第5，21天分别经乙醚麻醉后断头处死母鸡(每时间点3只/组)，迅速冰上取脑用于电镜切片的制备。具体步骤如下：①冰上取脑：迅速取脑，尽量保持组织新鲜，开颅或开椎管瞬间滴加预冷体积分数2.5 %戊二醛固定液。使用锋利的刀片成“拉锯式”将取下的脑干切成1 mm×1 mm ×1 mm组织块，并迅速投入预冷过的戊二醛固定液，4 ℃条件下固定24 h。②组织固定：将组织块置于0.1 mol/L PBS中充分漂洗3次，尽量洗去固定液，体积分数1%饿酸固定90 min(4 ℃)，重新置于0.1 mol/L PBS中漂洗3次。③脱水：逐级丙酮脱水(体积分数70%的丙酮15 min、80%的丙酮15 min、90%的丙酮15 min、100%的丙酮10 min×2次)；前三级在4 ℃中进行，后一级在室温中进行。④浸透和包埋：用包埋液618环氧树脂20 mL，硬化剂十二烷基琥珀酸酐(DDSA)20 mL，增塑剂邻苯二甲酸二丁醋(DBP)0.9 mL，加速剂2，4，6-三(二甲基氨基苯酚)(DMP)0.3 mL渗透组织块12 h。烤箱内聚合硬化形成包埋块(35 ℃，24 h；60 ℃，20 h)。⑤半薄切片定位：修块，在超薄切片机切厚度为1-10 μm的半薄切片，甲苯胺蓝染色，光学显微镜观察定位。⑥超薄切片制备和染色：在超薄切片机上进行50 nm超薄切片，铀铅双重染(醋酸铀30 min，柠檬酸铅30 min)。⑦电镜下观察，拍照。

主要观察指标：各组鸡的体质量变化，OPIDN症状，脑组织超微结构的改变。

统计学分析：实验计量资料用x(_)±s表示，使用SPSS 19.0统计软件进行数据分析，实验数据符合正态分布，采用单因素方差分析对不同组别数据进行比较，SNK-q检验进行组间两两比较，检验水准α=0.05。

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讨论

本次实验采用不同剂量TOCP染毒成年母鸡制备OPIDN模型，观察OPIDN对母鸡体质量及行为学的影响并对其临床症状进行评分，同时电镜下观察各组母鸡脑组织超微结构的改变。结果表明，1 000 mg/kg TOCP经灌胃一次性给予实验母鸡能有效的诱导出OPIDN；电镜下观察发现母鸡脑组织因TOCP迟发神经毒性而发生组织病理学改变，而正常对照组和PMSF预处理组在整个实验过程中未发现任何异常。

3.1 实验动物及TOCP染毒剂量的确定并非所有的动物暴露于有机磷化合物后都能诱发出迟发神经反应，实验证明人、猫、狗，鸡、马、猪和猴等动物对OPIDN敏感，而啮齿类动物包括大鼠、小鼠和豚鼠等通常对有机磷化合物诱发迟发神经毒性有抵抗力^[13]。研究发现即使大鼠神经系统出现了典型的OPIDN组织病理学改变但仍很难诱导出临床症状^[14]。

中国筛选有机磷化合物是否具有迟发神经毒性的国家标准及美国国家环境保护局制订的筛选有机磷农药毒性标准实验均使用家养产蛋母鸡作为实验动物^[15-16]。因为母鸡与人类的OPIDN临床表现非常接近，而且临床症状容易观察且相对于其他敏感动物更便宜易得，母鸡一直是研究OPIDN最常用的动物模型^[17]。在一些使用TOCP制造OPIDN模型的研究中，TOCP的剂量通常是750 mg/kg，实验750 mg/kg TOCP染毒组在实验终止时尚有2只母鸡没有表现出典型的OPIDN症状，原因可能是实验母鸡来自普通的饲养场，由于饲养场的条件不同，以及品系和遗传背景的不同导致对TOCP的耐受力也各不相同^[18]，所以为了保证顺利诱导出OPIDN症状，之后的实验中实验使用 1 000 mg/kg而不是750 mg/kg作为染毒剂量。对OPIDN敏感除了具有种属差异之外，还有年龄差异。有研究显示，小鸡对一次性接触DFP诱导的OPIDN不敏感，但是重复染毒可以诱导实验动物麻痹瘫痪^[19]。Abou-Donia等发现一次性口饲TOCP制造OPIDN模型有年龄依赖性，越成年的动物越容易发展出严重的OPIDN症状^[20]，实验选取10月龄成年母鸡作为实验动物。体质量是反映毒物毒性最常见的指标之一，实验用成年母鸡在正常饲养条件下体质量不会有较大的波动，但是实验发现TOCP染毒组母鸡体质量较对照组和PMSF预处理组显著减轻，TOCP染毒组母鸡体质量的改变可能是由于母鸡在OPIDN时期处于疾病状态，影响了母鸡的一般状态和消化系统功能，同时麻痹和瘫痪也影响母鸡的正常进食，最终导致体质量减轻。

3.2 病理组织取材时间的确定 TOCP在成年母鸡体内的代谢及排出非常迅速，有实验使用放射性¹⁴ C标记TOCP来研究其在母鸡体内代谢过程，结果发现47%的TOCP在经灌胃一次性给予实验母鸡后的头12 h即通过粪尿的方式排出体外，灌饲5 d后，体积分数99%的TOCP及其代谢产物已被排出体外^[21-22]。然而OPIDN症状往往是在TOCP排出体外后才被诱导出来，意味着OPIDN的起始发生在TOCP暴露的头几天。因为在有机磷化合物暴露的最初几天就已经出现和OPIDN机制相关的生物学改变，因此实验中5 d这个时间点的生物学及组织病理学改变作为OPIDN发生的早期事件，更与其发生机制相关联。而TOCP暴露21 d后的生物学及组织病理学改变代表了OPIDN临床症状阶段的晚期事件，与疾病发展机制相关联，同时可以检测有机磷化合物对神经系统最终的功能损伤。

3.3 病理取材部位的确定有机磷化合物迟发神经毒性所致病理损伤的程度取决于有机磷化合物的化学结构、摄入剂量、病理组织取材的时间及取材的部位等^[13]。Tanaka等^[23]通过Fink-Heimer染色法和尼氏染色法观察TOCP染毒后母鸡中枢神经系统的神经退行性改变，结果发现病变主要局限在脊髓、延髓和小脑内。在脊髓中，神经退行性变发生在薄束和脊髓小脑后束颈椎段，皮质脊髓束和lamina Ⅶ脊髓前角的腰骶段。在延髓中，神经退行性变发生在前庭外侧核、薄束核、楔核及颈外侧核，更轻微的改变发生在延髓的孤束核、下橄榄核、巨细胞核和外侧网状核等细胞核团及背侧脊髓小脑束，腹侧脊髓小脑束和脊髓丘系。在小脑中，神经退行性变发生在小脑核和小脑叶的颗粒层^[24]。同时Tanaka等^[25]对DFP联合TPP染毒后中枢神经系统的神经退行性改变进行研究，在小脑，丘脑，下丘脑，黑质，海马，脑干内各核团和大脑皮层等处均发现退行性变的轴突。

3.4 TOCP染毒诱导OPIDN的病理改变 OPIDN病理损伤以Wallerian样变性为主要特征，表现为轴突肿胀，髓鞘分层，板层断裂崩解，细胞骨架聚集进而随之解体出现不规则的电子致密-稀松区等。

Abou-Donia等^[26]通过免疫组化法发现有机磷染毒后中枢神经系统和周围神经系统有大量异常聚集的磷酸化的神经丝等，并且在OPIDN症状出现之前即可检测到轴浆内细胞骨架的异常。Christiane Massicotte等^[27]在对PSP染毒的鸡背根神经节超微结构改变进行观察，发现神经丝，微管分离增加，轴突肿胀，同时伴有线粒体变性。谢克勤等^[28]研究TOCP染毒母鸡时，电镜下还观察大脑皮质和脊髓线粒体超微结构的改变，OPIDN早期线粒体轻微肿胀，线粒体嵴断裂，减少，而OPIDN晚期则可以观察到线粒体空泡出现及线粒体嵴的消失，同时伴有明显的内质网肿胀，细胞核核膜溶解等。实验发现脑神经元退行性改变明显，核膜模糊不完整，内质网肿胀，线粒体肿胀，线粒体嵴变短变少、轴突肿胀，疏松不紧密并有气泡样改变，与上述资料文献报道一致。除了对比TOCP染毒组与对照组之间超微结构的差异，实验还观察了TOCP染毒前注射PMSF的PMSF预处理组的超微结构，发现该组的超微结构没有明显异常改变，进一步证明了PMSF预处理可以有效地阻止OPIDN的病理改变。

目前，对于 OPIDN 的发病机制仍不明确，有学者认为与神经病靶标酯酶的抑制和老化有关^[29-31]，另有学者认为OPIDN干扰了钙离子/钙调蛋白激酶Ⅱ的活性^[32-35]，最新研究表明自噬与OP导致的OPIDN存在密切联系^[37-39]。随着研究的不断深入，拓宽了人们对有机磷酸酯类化合物神经毒性的认识，有助于及早发现、早诊断、降低接触人群的潜在危险，对做好相关接触人群的监测和预防工作意义重大。

磷酸三邻甲苯酯诱导鸡迟发神经毒性模型和苯甲基磺酰氟的预处理

Organophosphorus poisoning-induced delayed neuropathy hen model induced by triorthocresyl phosphate and phenylmethylsulfonyl fluoride intervention

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